T7-systemet
Från Rilpedia
T7/ lac –systemet
I E. coli finns en promotorsekvens som kallas lac-promotorn, den kontrollerar transkription av lac-Z genen som kodar för enzymet β -galaktosidas. Aktivering av lac-operonet kräver närvaro av laktos och avsaknad av glukos. Man kan på konstgjord väg inducera lac-promotorn med IPTG, som är en laktosanalog. Tillsats av IPTG inaktiverar laktos- repressorn (lacI) så att den gen som står under lac-promotorns kontroll kan uttryckas. Lac-systemet används bland annat vid blåvit screening och i kombination med T7-systemet.
T7-systemet härstammar från bakteriofag T7 som innehåller en gen som kodar för ett virusspecifikt T7-RNA-polymeras. T7-polymeraset har hög aktivitet och hög specificitet då den är fem gånger snabbare än E. coli RNA-polymeras och den börjar transkribera direkt i anslutning till promotorn. För att utnyttja T7-systemet måste genen man vill transkribera ligga nedströms om T7-promotorn. T7-polymeras måste även finnas tillgängligt i cellen. Vanligt är att T7-polymerasgenen fås från en bakteriofag och inkorporeras i genomet.
